正畸文獻(xiàn)閱讀--青少年結(jié)束正畸治療后齦下菌斑生物膜微生物種類分析

摘要：

背景：

固定正畸治療是錯(cuò)合畸形最常見的矯治方式，但其有并發(fā)牙周問題的風(fēng)險(xiǎn)。青少年在正畸治療后的微生物及臨床表現(xiàn)的改變是否可逆，仍是未知的。

方法：

20位曾接受正畸治療的青少年被納入實(shí)驗(yàn)組，19位牙周健康的青少年被納入對(duì)照組。在初始時(shí)間點(diǎn)（T0）進(jìn)行牙周檢查，指標(biāo)參數(shù)包括牙齦指數(shù)（GI），齦溝深度（PD），齦溝出血指數(shù)（SBI），收集下切牙的齦下菌斑樣品。通過real-timePCR測(cè)定伴放線放線桿菌（A.a），牙齦卟啉單胞菌（P.g），中間普氏菌（P.i），福賽坦氏菌（T.f）和總細(xì)菌量。這些檢測(cè)將在1月后（T1）3個(gè)月后（T2）重新測(cè)定。

結(jié)果：

初始時(shí)間點(diǎn)（T0）實(shí)驗(yàn)組的臨床指標(biāo)（包括GI,PD, SBI）顯著高于對(duì)照組(P<0.05 or P<0.01)。在3個(gè)月后實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間的GI和SBI之間無明顯差異。實(shí)驗(yàn)組牙周細(xì)菌的檢出率和數(shù)量趨于正常（P＞0.05），PD及P.i總量仍顯著高于対照組（P<0.05 or P<0.01）。

結(jié)論：

去除矯治器后，正畸治療所導(dǎo)致的牙周病變?cè)?月后僅有部分能夠恢復(fù)。

介紹：

固定正畸治療一個(gè)常見的副作用就是牙周并發(fā)癥，包括牙齦炎和牙周炎。有研究指出正畸治療造成的牙齦改變是暫時(shí)的，可逆的，另外一些學(xué)者報(bào)道了正畸治療造成的明顯的牙周附著喪失，且不可逆轉(zhuǎn)。一項(xiàng)前瞻性研究顯示，正畸矯治器對(duì)牙周有負(fù)面的影響，而病變僅有部分能夠逆轉(zhuǎn)。

齦下菌斑中的厭氧微生物是引發(fā)和促進(jìn)牙齦炎牙周炎的關(guān)鍵致病因素。牙周病研究領(lǐng)域認(rèn)為牙周疾病的發(fā)生是由于牙周細(xì)菌相對(duì)豐富度與宿主防御系統(tǒng)平衡被打破。牙周病與許多種細(xì)菌有關(guān)，如伴放線放線桿菌（A.a），牙齦卟啉單胞菌（P.g），中間普氏菌（P.i），福賽坦氏菌（T.f）。其中T.f和P.g與牙周疾病嚴(yán)重度有關(guān)，而A.a和P.i是牙周病的次級(jí)有害菌種。另外，當(dāng)前有證據(jù)顯示正畸矯治器能夠改變微生物生態(tài)系統(tǒng)的平衡，增加微生物生態(tài)系統(tǒng)對(duì)病原菌的易感性。因此，理解牙周致病菌在正畸治療過程中的構(gòu)成和改變是非常重要的，這可以幫助我們避免那些不可逆的牙周損傷。

材料與方法：

倫理證明：該研究經(jīng)山東大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院及濟(jì)南口腔醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

樣本：

實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組選擇2015年6月至2015年10月至濟(jì)南口腔醫(yī)院正畸就診的患者。實(shí)驗(yàn)組包括20位青少年患者（8位男性，12位女性，平均年齡14.42±0.86歲），經(jīng)過了17.9-22.9個(gè)月的固定正畸治療，在治療前無牙齦炎或牙周炎的臨床表現(xiàn)。對(duì)照組包括19位牙周健康的青少年（9位男性，10位女性，平均年齡14.42±0.62歲），無正畸治療經(jīng)歷。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：1.不抽煙；2.無系統(tǒng)性疾??；3.X線下午明顯牙槽骨喪失；4.無固定修復(fù)體或活動(dòng)義齒；5.實(shí)驗(yàn)開始前3個(gè)月內(nèi)不可使用抗生素；6.實(shí)驗(yàn)開始之前6個(gè)月內(nèi)未行牙周治療。所有參與者接受了同一位正畸醫(yī)生的標(biāo)準(zhǔn)口腔衛(wèi)生宣教。實(shí)驗(yàn)組在去除了固定矯治器后選擇上下頜哈雷氏保持器保持。

臨床檢測(cè)：

收集下頜前牙31,32,41,42的臨床數(shù)據(jù)，包括GI，PD，SBI。每個(gè)參與者的得分均為4顆前牙的平均數(shù)。共測(cè)量3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，包括初始時(shí)間點(diǎn)T0，即剛?cè)コC治器即刻；T1，去除矯治器后1個(gè)月；T3，去除矯治器后3個(gè)月。

牙周檢測(cè)和樣本收集均由同一正畸醫(yī)生完成。探診深度在每顆牙上檢測(cè)三個(gè)位置，包括頰側(cè)的近中，中部及遠(yuǎn)中，利用牙周探針檢測(cè)牙齦邊緣到牙周袋或齦溝底的深度。

微生物取樣：

    要求參與者在取樣前兩小時(shí)內(nèi)不能進(jìn)食或飲水。從下頜前牙，31,32,41,42采集齦下微生物樣品，取樣前，仔細(xì)去除牙齦上菌斑，用無菌棉卷和空氣干燥分離取樣部位。用一個(gè)無菌濾紙條插入牙周袋中，直到遇到輕微的阻力，放置30秒后取出，放入含有0.5mlPBS的無菌離心管中，保存在-20℃下。

為什么選擇下切牙作為取樣的位置？因?yàn)?）后牙和前牙均有較高的牙周病發(fā)病率，均可作為微生物研究的代表，而選擇前牙能夠夠更好地避免唾液的干擾；2）正畸患者后牙和尖牙常發(fā)生牙齦增生現(xiàn)象，這是牙齒移動(dòng)和正畸力造成的而不是牙齦炎，因此這些部位的臨床檢查數(shù)據(jù)和微生物檢測(cè)結(jié)果會(huì)不一致；3）牙周檢查中常用16,21,24,36,41,44這些牙位來反應(yīng)全口的情況，而在嚴(yán)重?fù)頂D的患者中常選擇拔除雙尖牙，因此24,44有可能缺失，加上16,36常因?yàn)檠例X移動(dòng)和正畸力而出現(xiàn)牙齦增生的情況，因?yàn)槲覀冎荒苓x擇下切牙作為取樣的位置。

定量PCR檢測(cè)：

引物如下：

數(shù)據(jù)分析：

采用SPSS20.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，F(xiàn)isher精確檢驗(yàn)和獨(dú)立t檢驗(yàn)分析兩組性別和年齡的差異。Log10轉(zhuǎn)化用于描述微生物的數(shù)據(jù)，為了使分布和差異穩(wěn)定。臨床牙周參數(shù)和微生物數(shù)據(jù)的的描述使用中位數(shù)，第二十五百分位數(shù)（Q1），和第七十五百分位（Q3）。

Mann-Whitney U檢驗(yàn)和Wilcoxon秩和檢驗(yàn)比較組內(nèi)和組間的差異，F(xiàn)isher精確檢驗(yàn)對(duì)牙周致病菌的患病率兩兩比較。

結(jié)果：

兩組成員間性別和年齡無顯著差異。

Real-timePCR引物的特異性檢測(cè)

為確定PCR引物的特異性，分別用5對(duì)引物對(duì)4株目標(biāo)菌株的重組質(zhì)粒DNA進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表面所有特異性引物只能擴(kuò)增正確的目標(biāo)DNA，無交叉反應(yīng)。而通用引物可擴(kuò)增出四種菌株。

4種細(xì)菌的患病率

 四種牙周致病菌的患病率顯示如圖1:。在基礎(chǔ)時(shí)間點(diǎn)（T0）上，實(shí)驗(yàn)組的A.a和P.g的檢出率分別為89.5%和94.73%，與對(duì)照組相比無明顯差異。然而兩組中P.i的檢出率有顯著性差異，實(shí)驗(yàn)組有94.73%，而對(duì)照組只有31.58%。實(shí)驗(yàn)組的T.f檢出率有63.16%，而對(duì)照組有26.31%。這兩種細(xì)菌的檢出率上反應(yīng)出實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組顯著性差異。

    去除矯治器3個(gè)月后（T2），實(shí)驗(yàn)組的細(xì)菌檢出率分別為A.a 89.5%，P.g73.68%，P.i52.63%，T.f47.39%，與對(duì)照組相比均無顯著性差異。實(shí)驗(yàn)組P.i的檢出率在基礎(chǔ)時(shí)間點(diǎn)（T0）直至去除矯治器3個(gè)月后（T2）這段時(shí)間內(nèi)有顯著降低。

臨床標(biāo)本檢測(cè)：

絕對(duì)的細(xì)菌數(shù)量計(jì)數(shù)通過Log10轉(zhuǎn)化來實(shí)現(xiàn)，細(xì)菌比例由單個(gè)細(xì)菌數(shù)除以總細(xì)菌數(shù)來計(jì)算。

結(jié)果顯示T0時(shí)間點(diǎn)上，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)菌計(jì)數(shù)和比例分別是P.g3.49和0.39%，P.i3.99和1.21%，T.f3.34和0.13%，顯著高于健康對(duì)照組。T2時(shí)間點(diǎn)上，實(shí)驗(yàn)組P.g 1.72和0.8%，P.i 3.65和1.14%，T.f 3.01和0.12%，均表現(xiàn)為顯著減少。而實(shí)驗(yàn)組的A.a在T0與T2相比，無顯著性差異，與對(duì)照組相比也無差異。實(shí)驗(yàn)組總細(xì)菌數(shù)在T1，T2時(shí)間點(diǎn)上，與T0相比顯著減少。

臨床檢查數(shù)據(jù)分析：

初始時(shí)間點(diǎn)T0上，實(shí)驗(yàn)組GI,PD,SBI均顯著高于對(duì)照組，而去除矯治器后，隨時(shí)間推移，從T0到T2數(shù)據(jù)顯著下降。T2時(shí)間點(diǎn)上，兩組之間GI和SBI無顯著差異，實(shí)驗(yàn)組PD仍稍高于健康對(duì)照組。

討論：

我們的臨床檢查參數(shù)顯示去除矯治器后牙周狀態(tài)有很顯著的改善。Van等人的研究報(bào)道了矯治去除后PD和BOP會(huì)有顯著減少，但仍高于正畸治療前。我們的數(shù)據(jù)與該研究類似，去除矯治器3個(gè)月后，PD仍顯著高于健康對(duì)照組?？赡艿脑蚴?，PD的增加是有牙齦結(jié)締組織纖維改變?cè)斐傻?，?dāng)去除刺激因素，如菌斑，弓絲，托槽，并不能將牙齦組織逆轉(zhuǎn)為原本的樣子。

我們的對(duì)細(xì)菌的檢測(cè)顯示，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間A.a檢出率及菌量無明顯差異，而P.g，P.i 及T.f 有顯著性差異，且在去除矯治器后這三種細(xì)菌的檢出率及菌量均有所減少。這坑是因?yàn)锳.a是一種革蘭氏陰性兼性厭氧菌，而其余3種為專性厭氧菌，牙齦增生所造成的生態(tài)環(huán)境更有利于專性厭氧菌的生存。

我們的研究發(fā)現(xiàn)T0時(shí)間點(diǎn)上，兩組的總細(xì)菌量無顯著性差異，而不同細(xì)菌的量或比例由顯著增高。這說明了牙周疾病是由特定微生物造成的，與微生物數(shù)量增加無關(guān)。牙周致病菌可在健康人牙周中檢測(cè)到，但他們可能是機(jī)會(huì)致病菌，其比例上升到特定閾值即可誘發(fā)牙周組織損害。

結(jié)論：

去除矯治器后，齦下菌斑中的P.i，P.g，T.f有所減少，同時(shí)臨床表現(xiàn)有所改善。但其中PD及P.i并無明顯改善，因此正畸治療所導(dǎo)致的牙周病變?cè)谌コC治器3個(gè)月后僅有部分能恢復(fù)。

來源：浙一口腔正畸林軍