[摘要] 目的 比較經(jīng)檸檬酸酸蝕后的釉質(zhì)塊在不同再礦化時(shí)間后，刷牙對(duì)其表面磨損深度的影響。方法 60個(gè)釉質(zhì)塊平均分為A~F共6組，分別安置在10個(gè)志愿者的腭基托上。實(shí)驗(yàn)第1天，志愿者口腔中佩戴腭基托24 h，其后3d，每天進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)2次。

步驟如下：首先，用蜂蠟覆蓋F組釉質(zhì)塊，將腭基托置于50 mL檸檬酸溶液中酸蝕2 min，然后取出腭基托，沖洗，并將F組釉質(zhì)塊蜂蠟去除；其他組為酸蝕后經(jīng)過(guò)不同的再礦化時(shí)間后刷牙（A組：0 min；B組：20 min；C組：40 min；D組：60 min；E組：酸蝕并且再礦化，但不刷牙；F組：不酸蝕，再礦化，刷牙）。進(jìn)食及清潔時(shí)取出腭基托，其余時(shí)間均需佩戴腭基托。通過(guò)表面輪廓儀測(cè)量釉質(zhì)塊的磨損深度，并用掃描電子顯微鏡（SEM）觀察其表面形貌。結(jié)果 酸蝕后經(jīng)過(guò)不同時(shí)間的再礦化，刷牙對(duì)釉質(zhì)塊表面造成的磨損深度不同，各組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SEM結(jié)果顯示，釉質(zhì)酸蝕后再礦化時(shí)間越短，刷牙后表面凹陷越大越深越多，表面形態(tài)越粗糙。結(jié)論 釉質(zhì)被酸蝕后，在唾液中再礦化時(shí)間增加，立即刷牙會(huì)對(duì)釉質(zhì)表面形成較大的磨損，60 min后再刷牙可以有效減少刷牙對(duì)酸蝕釉質(zhì)的磨損。

[關(guān)鍵詞] 刷牙磨損；酸蝕；再礦化；含氟牙膏

牙齒酸蝕癥是指在沒(méi)有細(xì)菌參與的情況下，由于酸的化學(xué)侵襲或螯合作用，牙體表面硬組織局部性、病理性、慢性進(jìn)行性喪失的一種疾病。早期釉質(zhì)脫礦可以被唾液再礦化修復(fù)，但如果在進(jìn)食酸性飲料后立刻刷牙，就會(huì)導(dǎo)致牙齒結(jié)構(gòu)的不可逆性喪失[1]。本研究目的是測(cè)定酸蝕后經(jīng)過(guò)不同再礦化時(shí)間再刷牙對(duì)釉質(zhì)造成的磨損深度，并進(jìn)行組織學(xué)和形態(tài)學(xué)的觀察，為口腔保健提供理論依據(jù)。

1 、材料和方法

1.1 志愿者的選擇及培訓(xùn)

經(jīng)南昌大學(xué)附屬口腔醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，征集10名志愿者，要求符合如下條件：1）年齡為20~30歲，身體健康，無(wú)全身系統(tǒng)性疾??；2）牙列完整，咬合良好，無(wú)活躍性齲壞，無(wú)牙周疾?。?）近1個(gè)月內(nèi)無(wú)口腔及上呼吸道感染。

志愿者試驗(yàn)期間需佩戴腭基托。試驗(yàn)前對(duì)志愿者進(jìn)行培訓(xùn)，反復(fù)訓(xùn)練，刷牙采用統(tǒng)一方法和統(tǒng)一力度，受試期間不使用任何抗齲或抗菌成分的藥物及漱口水，避免食用高氟食品、酸性食品及一切零食。進(jìn)食時(shí)間和口腔清潔時(shí)間需將實(shí)驗(yàn)腭基托取下來(lái)，置于50 mL人工唾液中，進(jìn)食后用大量自來(lái)水漱口以清潔口腔（600 mL自來(lái)水漱口1 min），然后重新佩戴腭基托，除了這兩個(gè)時(shí)間段，其余時(shí)間腭基托均佩戴在口腔內(nèi)。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

1.2.1 釉質(zhì)塊的制備  收集新鮮拔除、健康無(wú)齲的正畸減數(shù)年輕前磨牙80顆，經(jīng)體視顯微鏡觀察，要求無(wú)齲、無(wú)裂紋、無(wú)釉質(zhì)發(fā)育不全等其他異常。牙齒清潔干凈，金剛砂片切取頰面釉質(zhì)，砂紙拋光釉質(zhì)面，制備成厚約2 mm、大小約5 mm×5 mm的釉質(zhì)標(biāo)本塊。超聲清洗、干燥，用維氏顯微硬度計(jì)HVS-1000進(jìn)行3次顯微硬度測(cè)定，挑選出顯微硬度值最接近計(jì)算平均值的60個(gè)釉質(zhì)塊進(jìn)行研究[2]。將標(biāo)本浸入10%甲醛溶液溶液（pH=7）中7 d，然后浸入0.1%麝香草酚飽和水溶液中待用。

1.2.2 檸檬酸溶液的配置  將0.042 g C6H8O7·H2O檸檬酸顆粒（分析純）加入到200 mL蒸餾水中，充分混勻、溶解，配置成濃度為0.001 mol·L-1、pH值約為3.20的實(shí)驗(yàn)用檸檬酸溶液。

1.2.3 人工唾液的配置  采用ISO/TR1027:1993標(biāo)準(zhǔn)配置人工唾液：NaCl 0.4 g、KCl 0.4 g、CaCl2·2H2O 0.759 g、NaH2PO4·2H2O 0.78 g、Na2S·2H2O 0.005 g、Urea 1 g，溶于1 000 mL蒸餾水中，調(diào)整pH值至7.0，高壓消毒，置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 牙膏和牙刷的選擇  牙膏選擇高露潔含氟牙膏（氟質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.14%），牙刷選擇Oral-b軟毛牙刷。

1.2.5 口內(nèi)腭基托的制備及實(shí)驗(yàn)分組  為每個(gè)志愿者制作腭基托，上頜磨牙區(qū)制備6個(gè)6 mm×6 mm×2 mm的凹陷，隨機(jī)選擇釉質(zhì)塊樣本，用蜂蠟固定于6個(gè)凹陷處，釉質(zhì)面朝外，近遠(yuǎn)中邊緣用樹(shù)脂固定，留下3 mm×5 mm的中央?yún)^(qū)域開(kāi)窗區(qū)。60個(gè)釉質(zhì)塊共分為A、B、C、D、E、F共6組，每組10個(gè)樣本。

1.2.6 唾液獲得性膜形成  實(shí)驗(yàn)第1天，志愿者在口腔中佩戴各自的腭基托（24 h），以便釉質(zhì)塊表面形成唾液獲得性膜。

1.2.7 酸蝕釉質(zhì)  實(shí)驗(yàn)第2天上午8:00進(jìn)行第1次實(shí)驗(yàn)。將腭基托從口內(nèi)取出，沖洗，吹干，F(xiàn)組釉質(zhì)塊表面覆蓋薄層蜂蠟，將腭基托置于50 mL檸檬酸溶液中酸蝕2 min，然后取出沖洗，并將F組釉質(zhì)塊表面的蜂蠟去除。

1.2.8 再礦化與釉質(zhì)磨刷  酸蝕后A組立即進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)。取豌豆大小（約0.3 g）牙膏，用牙刷對(duì)各個(gè)釉質(zhì)塊統(tǒng)一方向統(tǒng)一力度（輕輕按壓，使牙刷毛與釉質(zhì)塊成45°角，從釉質(zhì)塊近中向遠(yuǎn)中方向拂刷）磨刷40次（每秒刷1次，共40 s），然后沖洗干凈。志愿者口含20 mL雪碧，5 s后吞咽，而后將腭基托置入口腔內(nèi)。再礦化20 min后將腭基托裝置從口內(nèi)取出，沖洗干凈，對(duì)B組進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)（方法同A組），然后沖洗干凈，將腭基托重新置入口腔內(nèi)。再礦化40 min后對(duì)C組進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)（方法同A組），然后沖洗干凈，將腭基托重新置入口腔內(nèi)。再礦化60 min后對(duì)D組進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)（方法同A組），然后沖洗干凈，將腭基托重新置入口腔內(nèi)。E組進(jìn)行酸蝕和再礦化，但是不進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)。不同實(shí)驗(yàn)組的具體方法見(jiàn)表1。

表 1 實(shí)驗(yàn)分組及處理措施

1.2.9 循環(huán)操作  重復(fù)上述步驟1.2.7和1.2.8，完成一次完整的釉質(zhì)酸蝕后刷牙再礦化實(shí)驗(yàn)，每天進(jìn)行兩次（上午8:00和下午8:00），共進(jìn)行3 d；在第6次刷牙實(shí)驗(yàn)后，取出各個(gè)釉質(zhì)塊。

1.2.10 表面輪廓儀測(cè)量磨損深度  用AMBIOS-XP2型表面輪廓儀測(cè)量各個(gè)釉質(zhì)塊的磨損深度。樹(shù)脂覆蓋的面作為基準(zhǔn)面，取釉質(zhì)塊中1/3處基準(zhǔn)面和釉質(zhì)塊刷牙磨損面之間的高度差作為磨損深度。輪廓儀針尖在釉質(zhì)塊表面走過(guò)的距離中記錄3個(gè)讀數(shù)，取其平均值。單位為μm。

1.2.11 掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope，SEM）觀察表面形貌  各組標(biāo)本在FEIQuanta-200F型環(huán)境SEM下進(jìn)行觀察，觀察釉質(zhì)塊的表面形貌。

1.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理  本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用SAS 9.2軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入和統(tǒng)計(jì)分析，6組間比較采用秩和檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用LSD法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為雙側(cè)α=0.05。

2 、結(jié)果

2.1 磨損深度

各組的磨損深度見(jiàn)表2：隨著釉質(zhì)酸蝕后再礦化時(shí)間的增加，釉質(zhì)表面的磨損深度逐漸減小，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

分析結(jié)果可見(jiàn)：

（1）刷牙會(huì)對(duì)酸蝕后的釉質(zhì)表面造成磨損，A、B、C、D組釉質(zhì)表面磨損深度與對(duì)照組E組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；

（2）酸蝕對(duì)釉質(zhì)表面磨損有影響，A、B、C、D組與對(duì)照組F組比較，磨損深度增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 SEM觀察

SEM下各組的表面形貌見(jiàn)圖1：酸蝕后立即進(jìn)行刷牙（A組）的釉質(zhì)塊表面呈現(xiàn)大量密集不平整的凹陷，凹陷程度較深；酸蝕后再礦化20 min再進(jìn)行刷牙（B組）的釉質(zhì)塊表面呈現(xiàn)散在分布凹陷，凹陷數(shù)量較A組的少，凹陷程度也較A組稍淺；酸蝕后再礦

化40 min（C組）再進(jìn)行刷牙的釉質(zhì)塊表面呈現(xiàn)少量凹陷；酸蝕后再礦化60 min再進(jìn)行刷牙（D組）的釉質(zhì)塊表面呈現(xiàn)較淺的散在的小凹陷；只進(jìn)行酸蝕和再礦化，不進(jìn)行刷牙實(shí)驗(yàn)（E組）的釉質(zhì)塊表面呈現(xiàn)小的點(diǎn)狀的凹陷；只進(jìn)行再礦化和刷牙，不進(jìn)

行酸蝕（F組）的釉質(zhì)塊表面呈現(xiàn)較平整光滑的表面，無(wú)明顯凹陷。通過(guò)觀察6組釉質(zhì)塊的SEM圖片可以看出，釉質(zhì)被酸蝕后再礦化時(shí)間越短，其表面凹陷越大越深越多，表面形態(tài)越粗糙。

表 2 酸蝕后不同再礦化時(shí)間對(duì)磨損深度的影響

A：A組；B：B組；C：C組；D：D組；E：E組；F：F組。

圖 1 各組的表面形貌 SEM ×8000

3 、討論

酸性食物和酸性飲料的消費(fèi)量增加已成為酸蝕癥患病率上升的一個(gè)重要影響因素[3]，牙酸蝕癥已成為一種常見(jiàn)的口腔疾病。當(dāng)進(jìn)食酸性食物或碳酸飲料后，釉質(zhì)局部微環(huán)境的pH值下降至低于5.5時(shí)，硬組織中羥磷灰石晶體溶解破壞，表面脫鈣不僅直

接導(dǎo)致釉質(zhì)的損失，同時(shí)也降低釉質(zhì)表面的硬度和彈性模量，因此酸蝕后的釉質(zhì)比起正常的釉質(zhì)，更容易受到磨損和磨耗。

為了研究酸蝕癥和刷牙磨損之間的關(guān)系，眾多研究者設(shè)計(jì)出了各種不同的實(shí)驗(yàn)方法來(lái)進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)環(huán)境基本分為口腔內(nèi)實(shí)驗(yàn)、口腔外實(shí)驗(yàn)和口腔內(nèi)外聯(lián)合實(shí)驗(yàn)?？谇煌鈱?shí)驗(yàn)由于要借助于人工唾液，而不同配比的人工唾液對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)有不同的影響

[4]，而且，口腔環(huán)境的復(fù)雜性和多樣性使得體外無(wú)法準(zhǔn)確模擬口腔環(huán)境，而在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，為了不使口腔中的其他牙齒處在被酸蝕的環(huán)境中，酸蝕釉質(zhì)又不可能在口腔內(nèi)進(jìn)行，因此，建立口腔內(nèi)外聯(lián)合實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ拖到y(tǒng)具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)采取口腔內(nèi)

外聯(lián)合實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，將釉質(zhì)塊通過(guò)腭基托固定，再礦化步驟在口腔內(nèi)進(jìn)行，而酸蝕和刷牙磨損在口腔外進(jìn)行。

在酸蝕發(fā)生的最初階段，釉質(zhì)發(fā)生軟化，酸使釉質(zhì)結(jié)構(gòu)完整性發(fā)生改變，同時(shí)機(jī)械強(qiáng)度降低。在這個(gè)階段，軟化的釉質(zhì)可以實(shí)現(xiàn)再礦化[5]。對(duì)軟化釉質(zhì)再礦化最重要的因素是唾液和氟化物[6]。有研究[7]認(rèn)為，唾液在碳酸飲料酸蝕釉質(zhì)脫礦過(guò)程中通

過(guò)多種方式發(fā)揮著保護(hù)牙齒的作用。在口腔內(nèi)，牙齒表面被覆著由唾液蛋白組成的獲得性膜。這層獲得性膜作為物理屏障，有保護(hù)釉質(zhì)表面、抵抗酸蝕的作用，作為化學(xué)屏障，有緩沖飲料、降低飲料和牙齒界面pH值的作用[8-9]。此外，當(dāng)飲料在口內(nèi)

吞咽時(shí)，唾液的分泌可以緩沖口腔內(nèi)pH值、促進(jìn)酸在口內(nèi)的消除，減少飲料作用于牙齒的時(shí)間，從而減少牙齒脫礦[10]。唾液的緩沖能力是對(duì)抗酸蝕癥發(fā)病機(jī)制中最重要的生物因子[11]。唾液中過(guò)飽和狀態(tài)的鈣和磷酸鹽，以及堿性或中性環(huán)境，是使

早期軟化釉質(zhì)再礦化的先決條件[12]。唾液中鈣磷等常見(jiàn)離子的含量會(huì)對(duì)釉質(zhì)和牙本質(zhì)的礦物質(zhì)產(chǎn)生影響，導(dǎo)致礦物質(zhì)的溶解減慢[13]。研究[14-15]顯示，隨著再礦化時(shí)間的延長(zhǎng)，刷牙對(duì)釉質(zhì)牙本質(zhì)表面造成的磨損深度逐漸減小，得出的結(jié)論是，進(jìn)

食酸性飲料后60 min再刷牙對(duì)牙齒有較好的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果和以往的研究結(jié)果一致，即隨著酸蝕后再礦化時(shí)間的延長(zhǎng)，刷牙對(duì)釉質(zhì)表面的損傷深度逐漸減小。

氟化物是公認(rèn)的預(yù)防齲病的有效方法，其對(duì)酸蝕牙齒是否具有保護(hù)作用是近年研究的熱點(diǎn)。氟的酸蝕抑制作用機(jī)制主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面，一方面氟離子（F-）與羥磷灰石晶體中的OH-發(fā)生交換，或者與口腔中的Ca2+和PO43-結(jié)合形成氟磷灰石，氟磷灰

石晶體在酸液中溶解的臨界pH值顯著低于羥磷灰石晶體，能提高牙齒的抗酸能力；另一方面，F(xiàn)-與游離Ca2+能結(jié)合生成氟化鈣沉淀（CaF2），阻止Ca2+的流失，為牙齒提供一個(gè)Ca2+的儲(chǔ)庫(kù)，當(dāng)酸攻擊釉質(zhì)時(shí)，釉質(zhì)表面沉積的CaF2顆粒能夠中和酸，緩

沖口腔pH，成為酸攻擊時(shí)的暫時(shí)屏障[16-17]。含氟牙膏是一種非常普及的家庭及個(gè)人口腔衛(wèi)生保健措施，使用含氟牙膏可大大提高口腔或牙面的氟離子水平，甚至在刷牙后10 h仍有明顯效果。有研究[18]表明，酸蝕牙齒在刷牙時(shí)，使用含氟牙膏能夠

增強(qiáng)軟化釉質(zhì)的再礦化作用，與不含氟牙膏相比，能夠減少對(duì)釉質(zhì)面的磨損[19]，從而對(duì)酸蝕的釉質(zhì)起到更好的保護(hù)作用。Magalhaes等[20]發(fā)現(xiàn)，對(duì)酸蝕后的釉質(zhì)刷牙時(shí)，使用質(zhì)量濃度0.11%的含氟牙膏與非含氟牙膏相比，釉質(zhì)磨損程度大約降低

30%。Moretto等[21]研究發(fā)現(xiàn)，與含0.11%氟化物牙膏相比，0.5%氟化物牙膏能明顯降低酸蝕后釉質(zhì)的磨損。然而Rios等[22]研究發(fā)現(xiàn)，使用不含氟牙膏和含質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.11%、0.5%的含氟牙膏對(duì)酸蝕后釉質(zhì)的磨損并沒(méi)有明顯差異。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，即使使

用含氟牙膏，在進(jìn)食酸性飲料1 h后刷牙，對(duì)釉質(zhì)也有一定的磨損。

綜上所述，酸蝕和刷牙磨損相互促進(jìn)，被檸檬酸酸蝕過(guò)的釉質(zhì)，刷牙是導(dǎo)致其表面釉質(zhì)喪失的重要因素之一。釉質(zhì)被檸檬酸酸蝕后立即刷牙對(duì)其損害最大，對(duì)釉質(zhì)表面造成的磨損深度最大，可導(dǎo)致釉質(zhì)表面粗糙不平整，形成密集的凹陷，因此進(jìn)食碳

酸飲料或酸性食物后，不建議立即刷牙，即使使用含氟牙膏，間隔60 min刷牙造成的釉質(zhì)磨損深度依然較不酸蝕直接刷牙造成的磨損深度大。唾液對(duì)酸蝕后的釉質(zhì)再礦化有重要作用，被檸檬酸酸蝕過(guò)的釉質(zhì)，經(jīng)過(guò)的唾液再礦化時(shí)間越久，刷牙對(duì)其造

成的磨損深度越小；唾液對(duì)酸蝕后釉質(zhì)的再礦化作用并不能完全抵消刷牙對(duì)其的磨損作用，但是進(jìn)食酸性飲料60 min后再刷牙可以有效減少刷牙對(duì)酸蝕釉質(zhì)的磨損。

來(lái)源： 陳麗培 歐曉艷 華西口腔醫(yī)學(xué)雜志